Práctica 16. Enzima LDH

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1. OBJETIVO

Determinación cuantitativa de lactato deshidrogenasa (LDH).

2. FUNDAMENTO

La lactato deshidrogenasa (LDH) cataliza la reducción del piruvato por el NADH, según la siguiente reacción:
La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio determinado fotometricamente, es proporcional a la concentración catalítica de LDH en la muestra ensayada1 . 

 La lactato deshidrogenasa (LDH) es una enzima, distribuida por todo el organismo humano. Las mayores concentraciones de LDH se encuentran en el hígado, corazón, riñón, músculo esquelético y eritrocitos. 
El nivel de LDH en suero esta elevado en pacientes con enfermedades del hígado, infartos de miocardio, alteraciones renales, distrofias musculares y anemias1,4,5. 
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

3.MATERIALES

  • Baño termostático
  • Gradilla
  • Pinzas
  • 3 tubos de ensayo
  • Micropipetas
  • Puntas para micropipetas
  • Espectrofotómetro
  • Agua destilada
  • 2 cubetas de espectrofotometría
  • Portacubetas
  • Reactivos: 
  • Muestra de plasma

4.PROCEDIMIENTO

1. Encendemos el espectrofotómetro 
2. Ajustamos el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipeteamos en la cubeta:

  

   
4. Mezclamos e incubamos 1 min.

5. Leemos la absorbancia inicial de la muestra y ponemos en marcha el cronómetro.
6. Leemos la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
7. Calculamos el promedio del incremento de absorbancia por minuto.

5.ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS


Teniendo en cuenta que los valores de referencia son a 37ºC 230-460 U/L LDH, obtuvimos valores muy por encima de los normales.
Esto se debe a que el espectrofotómetro usado no mantiene los 37ºC constantes.

6.OBSERVACIONES

La práctica no fue realizada con éxito debido al problema citado anteriormente. En cuanto a la práctica en sí, se trata de una técnica minuciosa que requiere de habilidad, precisión para obtener buenos resultado y fiables.


Comentarios

  1. caxito11 de marzo de 2020, 16:38

    Muy orgulloso del trabajo diario de alumnas como esta. Todo muy bien explicado y detallado con lenguaje claro para todo tipo de lectores. Enhorabuena, mis dieces.

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