Práctica 7. Determinación de proteínas totales

1. OBJETIVO

Determinar de forma cuantitativa proteínas totales.

2. FUNDAMENTO

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo. Actúan como elementos estructurales y de transporte. Se dividen en dos fracciones, albúmina y globulinas. Su determinación es útil en la detección de: 
      - Hiperproteinemia producida por hemoconcentración, deshidratación o aumento en la concentración de proteínas especificas. 
      -Hipoproteinemia por hemodilución debida a un defecto en la síntesis         proteica, perdidas excesivas (hemorragias) o catabolismo proteico excesivo.
 El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

En medio alcalino, las proteínas dan un intenso color violeta azulado en presencia de sales de cobre; contiene yoduro como antioxidante. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de proteína total en la muestra ensayada.

3.MATERIALES

• Espectrofotómetro  a 540 nm.
• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. 
• Micropipetas y sus respectivas puntas.
• Papel de filtro
• Muestra: suero o plasma
• Soporte de cubetas
• Reactivos:                              

                             

                                        

                       

4.PROCEDIMIENTO

    1. Antes de todo, debemos encender el espectrofotómetro
    2. Ajustamos el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
    3.A continuación, pipeteamos en una cubeta:        
                               

   

    4.Mezclamos y esperamos 10 minutos a Tªambiente para que tenga lugar las reacciones correspondientes.

    5.Una vez pasado el tiempo , leemos la absorbancia (A)  del patrón y de a muestra, frente al blanco de reactivo.(El color será estable como mínimo 30 minutos).

Primer color: recién vertidos los reactivos y la muestra.

 Segundo color: pasados los 10 minutos.

5.ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

Teniendo en cuenta los valores de referencia:

• Adultos 6'6-9'3 g/dL

Según el resultado tan bajo de 2'938g/dL obtenido, podríamos decir que dicho paciente tiene un nivel de proteínas bajo, es decir, se trataría de una persona hipoproteinémica y por tanto deberíamos de realizar un proteinograma.

6.OBSERVACIONES Y GESTIÓN DE RESIDUOS

En cuanto a los resultados que obtuvimos, no eran correctos, ya que se sabían los datos de dicho paciente y no eran los obtenidos por mi grupo. Por tanto, teniendo en cuenta los malos resultados, deberíamos de plantearnos en que nos pudimos equivocar y como podríamos hacer para evitarlo.
En mi opinión , el exceso o defecto de tiempo pudo ser un error ya que no se terminarían de producir todas las reacciones correspondientes o todo lo contrario. También la homogeneización de la muestra pudo ser otro error.
En cuanto a la gestión de residuos, las cubetas fueron lavadas y reutilizadas.