Práctica 3. Determinación de glucosa - TR

1. OBJETIVO

Determinar cuantitativamente la glucosa presente en una muestra problema.

2. FUNDAMENTO

La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico. El peróxido de hidrógeno (H2O2), producido se detecta mediante un aceptor cromogénico de oxigeno, fenol-ampirona en presencia de peroxidasa (POD).La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra ensayada.
La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo; la insulina facilita la entrada de glucosa en las células. La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucémia, causada por un déficit de insulina 1,5,6 . El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

3.MATERIALES

• Espectrofotómetro
• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz
• Micropipetas de 10 µL y de 1000 µL
• Papel de filtro
• R1: tampón (TRIS pH 7,4 Fenol)
• R2: enzimas (Glucosa oxidasa (GOD)  ,   Peroxidasa (POD)  y 4-Aminofenazona (4-AF))
• Glucosa Cal: Patrón primario acuoso de Glucosa 

4.PROCEDIMIENTO

1. Antes de todo, debemos encender el espectrofotómetro para que se vaya calibrando
2. Preparar tres cubetas de espectrofotómetro que se denominen Blanco, Patrón y Muestra.
3. En el Blanco pipetear 1 ml de solución RT.
4. En el Patrón pipetear 1 ml de solución RT y 10 μL de la sustancia patrón (S).
5. Repetir el procedimiento con la Muestra, pipetear 1 ml de solución RT y  10 μL del suero sanguíneo problema.

6. Mezclar y esperar 30 min a temperatura ambiente (15-25ºC).

7.Leer la absorbancia del Patrón y la Muestra, a 505 nm de longitud de onda, frente al Blanco de reactivo. 

5.ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

 -    Valores de referencia:

    Suero o plasma: 60 – 110 mg/dL , 3,33 – 6,10 mmol/L

    Siguiendo los valores de referencia anteriores, nos ha salido una cantidad de  glucosa atípica. Dicha cantidad está muy por encima de los valores.

Teniendo en cuenta dicho resultado, habría que repetir la prueba por si ha habido fallos en el pipeteo, en el tiempo, etc.

6.CONDICIONES DE SEGURIDAD Y GESTIÓN DE RESIDUOS

Es necesario cuidar el espectrofotómetro ya que es un aparato muy delicado.

Las cubetas deben ser vaciadas y/o lavadas, las puntas de micropipeta tiradas y todo en orden para evitar accidentes.